qrt-pcr用水培苗培养流程

1 春化-琼脂培养基培养

①种子灭菌（均需在超净台作业）：

1. H2SO4处理3min30s。（用手上下震荡或摇床）
2. ddH2O清洗3遍。
3. 75%酒精清洗3min30s。
4. 5% NaClO 处理5-10min（用手上下震荡或摇床）。
5. ddH2O清洗5遍。
6. 铺种子至1/2MS培养基。
7. 封口膜封好后，4℃春化3天。（选做）

②放入步入式培养间（25℃）培养7天。

2 置入水培盒

1. 灭菌好水培盒，保证无菌。
2. 放入一张A4打印纸在水培盒上筛孔之上，用水侵湿A4纸。
3. 用镊子以互相有3-4孔间隔距离戳孔。
4. 将培养基内的植物按照孔之处，将其根插入孔内。
5. 在水培盒内加入水分，恰好接触根部，有利于根系向下生长，将水培盒上筛板放入水培盒内。盖子内部表面上喷洒水，水培盒子放入25℃培养箱。
6. 培养15Day时，更换一次营养液，注意及时将营养液移除，每日换水。
7. 培养30Day时，可进行各种处理，在不同时间点取样（Nacl处理浓度为250 mmol/L）可以进行提RNA取样，并接着进行转cDNA之操作。