盐胁迫实验设计

预实验设计

设置0，50，100，200，300，400mM共6个浓度梯度

每盆4株，每个梯度3个花盆重复。
一个梯度共4株*3盆=12株。
所有梯度共18盆，共72株。
为了保证有足数的苗子，多种一倍，共计36盆，144株。

其中对使用0（CK），300，400 mM NaCl处理3天后的植株，取中间叶片扫描。
记录各浓度梯度下植株出现萎蔫与开始处理之间间隔的天数。
出现萎蔫当天对植物进行株高测量，取样。处理前取一次样。（用于测定生理指标与转录组）
最终通过各浓度梯度下的生理指标确定拐点，确定草木樨耐盐浓度上限。

实验设计

1	使用拐点梯度的NaCl浓度对草木樨进行处理，测定处理前后叶片相对质膜透性（电导率），Na+,K+,Cl-

与包爱科老师谈论毕业论文实验计划

关于WD40实验

1.对于酵母异源表达实验，可能效果不好，原因是WD40是比较上游的基因，可能通过调控或结合其他基因才调控盐胁迫，建议先做RNAi，从中选择1-2个基因做互作蛋白验证。

2.建议找蒺藜苜蓿中WD40基因的同源蛋白，找是否有突变体，在蒺藜苜蓿上验证WD40的功能。

3.建议切割子叶，在子叶处沾染GV3101，从而作为验证地上部的胁迫反应的侵染实验。

关于盐胁迫实验

1.建议使用4-5周龄的苗子，使用红砂或蛭石，或混合栽培。

2.设置预实验浓度梯度为0,50,100,200,300,400mM，找出拐点

3.在正常生长时期，仅使用1/2霍格兰营养液浇灌，3-4天后再次换营养液浇灌，浇至托盘。

4.当要进行盐处理时，应该控水一晚上，在托盘内划线浇混有不同盐浓度的营养液，每隔两三天补水，每隔四五天，换新的混有不同盐浓度的营养液。

5.叶片一但出现萎蔫，应立即取样。计算出现萎蔫是第几天。

6.两个时间节点测量：①处理前。②不同浓度处理后出现萎蔫时。

7.测株高，生物量，光合，叶片相对含水量，叶片相对质膜透性（使用鲜叶片），10株一个处理。

8.测量叶片相对质膜透性的方法：使用去离子水浸泡2小时，若电导率高，则说明质膜破裂度高，盐分泄露多。若电导率低，则说明质膜破裂度低，盐分泄露少。最后全部煮，再测电导率，为最大电导率。进行比值。

9.建议在CaCl2中浸泡根部20min后，再测根部盐分，否则会把质外体盐算入。

10.建议Na+,K+,Cl-都测。

11.说明盐去哪了这个问题：用去离子水将叶片洗净，洗后的盐水，测电导率。

12.Na+，K+荧光，吴洪洪，华中农大，CoriNa共聚焦显微镜测定。

13.若需要种180株，最好种300株，以防止出现出苗不一致。

14.预实验取消时间节点的尺度。