qrt-pcr实验流程

1 设计引物

• 使用perlprimer 5软件

1. 导入需要实验的基因的cds（即mrna）列，gene序列
2. 设置退火温度范围，碱基数范围
3. 交公司合成

• 或另一种办法，使用NCBI pcr引物设计工具 ，参数调为150-200 设计即可

2 冲兑引物（加ddH2O）

• 有些引物为干粉状，需要按照引物管壁上的要求冲兑

3 按照qrt-PCR体系加样

• 注意除了第一次加物质的枪头外，其余次加物质皆要换枪头。

• 故极力推荐配置好预混液，这样可减少枪头消耗量。

Qrt-PCR 96孔板规划 批次:01批次 日期：2021年 12月 日 周

	一	二	三	四	五	六	七	八	九	十	十一	十二
	CK	CK	CK	3H	3H	3H	24H	24H	24H	CK	3H	24H
一	MaRab1	MaRab1	MaRab1	MaRab1	MaRab1	MaRab1	MaRab1	MaRab1	MaRab1	MaRab23	MaRab23	MaRab23
二	MaRab5	MaRab5	MaRab5	MaRab5	MaRab5	MaRab5	MaRab5	MaRab5	MaRab5	MaRab23	MaRab23	MaRab23
三	MaRab11	MaRab11	MaRab11	MaRab11	MaRab11	MaRab11	MaRab11	MaRab11	MaRab11	MaRab23	MaRab23	MaRab23
四	MaRab13	MaRab13	MaRab13	MaRab13	MaRab13	MaRab13	MaRab13	MaRab13	MaRab13	MaRab25	MaRab25	MaRab25
五	MaRab15	MaRab15	MaRab15	MaRab15	MaRab15	MaRab15	MaRab15	MaRab15	MaRab15	MaRab25	MaRab25	MaRab25
六	MaRab17	MaRab17	MaRab17	MaRab17	MaRab17	MaRab17	MaRab17	MaRab17	MaRab17	MaRab25	MaRab25	MaRab25
七	MaRab19	MaRab19	MaRab19	MaRab19	MaRab19	MaRab19	MaRab19	MaRab19	MaRab19
八	Acting	Acting	Acting	Acting	Acting	Acting	Acting	Acting	Acting

一个基因的预混液配置

1	MIX	5μL	①②③④合计9μL乘12倍（可加8联管之9个小管）为108微升 （此为预混液） 使用引物类似的离心管
2	引物1	0.2μL
3	引物2	0.2μL
4	ddH2O	3.6μL
5	cDNA	1μL	每个管子加入的cDNA（即处理时间点的不同）不同（不加入到预混液内）

故①②③④在一起的预混液可加到9个空管子，再朝9个管子内加入不同时间点的cDNA。

4 放入qRT-PCR机器内进行扩增检测

1. 设置好扩增程序。
2. 设置好加样，基因，处理，重复之实验设计安排，96孔板之排列。
3. 开动机器，开始扩增检测。

5 EXCEL处理qrt-PCR之数据

照另外教程即可【Qrt-pcr数据处理流程.md】